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  分光光度计原理内行人都知道,物质在光的照射激发下,产生了对光吸收的效应,物质对光的吸收是具有选择性的,各种不同的物质都是具有其各自的吸收光谱,因此当某单色光通过溶液时,其能量就会被吸收而减弱,光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系,也即符合于比色原理比耳定律。
  然而对于分光光度计吸光度测量条件的选择,相信很多人都不太了解,一般来说可依据以下几点去综合选择:
  1.入射光波长的选择
  应根据吸收光谱曲线,选择溶液具有最大吸收时的波长作为入射光的波长。
  如显色剂与钴络合物在420nm波长处均有最大吸收峰。如用此波长测定钴,则未反应的显色剂会造成干扰而降低测定的准确度。因此必须选择在500nm波长处测定,在此波长下显色剂不发生吸收。而钴络合物则有一吸收平台。
  2.参比溶液的选择
  1)如果显色剂或其他试剂略有吸收,应用空白溶液(不加试样的溶液)作参比溶液。
  2)如果仅待测物与显色剂的反应产物有吸收,可用纯溶剂作参比溶液。
  3)如试样中其他组分有吸收,但不与显色剂反应,则当显色剂无吸收时,可用试样溶液作参比溶液,当显色剂略有吸收时,可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂,以此溶液作参比溶液。
  3.吸光度读数范围的选择
  实践证明,吸光度在0.2-0.5内时,测量的相对误差最小。
  可用两种方法来调整被测溶液的吸光度:
  1)控制被测溶液的浓度。如改变取样量,改变溶液的浓缩倍数或稀释倍数。
  2)选择不同的比色皿。吸光度小的溶液要用光程长的比色皿,吸光度大的溶液要用光程短的比色皿。
分光光度计
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